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關于HPLC的常見問題及解答
更新時間:2011-04-14   點擊次數:1923次

一、問:用HPLC進行分析時保留時間有時發生漂移,有時發生快速變化,原因何在?如何解決?

  答:關于漂移問題:

  1.溫度控制不好,解決方法是采用恒溫裝置,保持柱溫恒定

  2.流動相發生變化,解決辦法是防止流動相發生蒸發、反應等

  3.柱子未平衡好,需對柱子進行更長時間的平衡

  關于快速變化問題

  1.流速發生變化,解決辦法是重新設定流速,使之保持穩定

  2.泵中有氣泡,可通過排氣等操作將氣泡趕出。

  3.流動相不合適,解決辦法為改換流動相或使流動相在控制室內進行適當混合

  二、問:液相色譜中峰出現拖尾或出現雙峰的原因是什么?

  答:1.篩板堵塞或柱失效,解決辦法是反向沖洗柱子,替換篩板或更換柱子。

  2.存在干擾峰,解決辦法為使用較長的柱子,改換流動相或更換選擇性好的柱子

  三、問:HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法

  答:1.樣品量不足,解決辦法為增加樣品量 醫.學教育網搜集整理

  2.樣品未從柱子中流出。可根據樣品的化學性質改變流動相或柱子

  3.樣品與檢測器不匹配。根據樣品化學性質調整波長或改換檢測器

  4.檢測器衰減太多。調整衰減即可。

  5.檢測器時間常數太大。解決辦法為降低時間參數

  6.檢測器池窗污染。解決辦法為清洗池窗。

  7.檢測池中有氣泡。解決辦法為排氣。

  8.記錄儀測壓范圍不當。調整電壓范圍即可。

  9.流動相流量不合適。調整流速即可。

  10.檢測器與記錄儀超出校正曲線。解決辦法為檢查記錄儀與檢測器,重作校正曲線。

  四、問:做HPLC分析時,柱壓不穩定,原因何在?如何解決?

  答:原因可能有:

  1.泵內有空氣,解決的辦法是清除泵內空氣,對溶劑進行脫氣處理;

  2.比例閥失效,更換比例閥即可;

  3.泵密封墊損壞,更換密封墊即可;

  4.溶劑中的氣泡,解決的辦法是對溶劑脫氣,必要時改變脫氣方法;

  5.系統檢漏,找出漏點,密封即可;

  6.梯度洗脫,這時壓力波動是正常的。

  五、問:我購買的HPLC柱驗收測試時柱壓過高,請問為什么?

  答:柱壓過高是HPLC柱用戶zui常碰到的問題。其原因有多方面,而且常常并不是柱子本身的問題,您可按下面步驟檢查問題的起因。 醫學教|育網搜集整理

  1.拆去保護預柱,看柱壓是否還高,否則是保護柱的問題,若柱壓仍高,再檢查;

  2.把色譜柱從儀器上取下,看壓力是否下降,否則是管路堵塞,需清洗,若壓力下降,再檢查;

  3.將柱子的進出口反過來接在儀器上,用10倍柱體積的流動相沖洗柱子,(此時不要連接檢測器,以防固體顆粒進入流動池)。這時,如果柱壓仍不下降,再檢查;

  4.更換柱子入口篩板,若柱壓下降,說明您的溶劑或樣品含有顆粒雜質,正是這些雜質將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高,請與。一般情況下,在進樣器與保護柱之間接一個在線過濾器便可避免柱壓過高的問題,SGE提供的Rheodyne7315型過濾器就是解決這一問題的*選擇。
 

 

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